軟海綿酸相關應用說明

大田軟海綿酸液相色譜串聯質譜檢測方法的研究

目的：利用高效液相色譜-串聯質譜法建立海產品中大田軟海綿酸(Okadaic acid, OA)的檢測方法。方法：貝樣品提取液經AccuBond(上標 Ⅱ) SPE silica固相萃取小柱預分離和富集，用三級四極桿串聯質譜(MS/MS)作為HPLC的檢測器，使用正離子電噴霧(ESI)電離方式，多反應監測(MRM)掃描模式，選擇母→子離子對m/z 827→m/z 723，m/z827→m/z809作為定量檢測的離子對，HPLC的流動相為乙腈：1%甲酸－水（體積比70:30），色譜柱為Agilent Extend-C18(2.1×150mm，Φ5.0μm)，對OA標準品及加標樣品和實際樣品進行HPLC-MS/MS檢測。結果：方法線性回歸方程為Y=193.07X-780.6(Q1/Q3：m/z827.4→723.5); Y=83.021X-335.6(Q1/Q3：m/z827.4→509.5)，相關系數r^2均為0.9991；線性范圍為10~800μg/L。樣品平均回收率為83.99%，平均RSD為4.34%。結論：建立的HPLC-MS/MS方法靈敏、快速、準確，可用于海產品中貝類樣品OA限量標準檢測。

大田軟海綿酸對FL細胞DNA的損傷及凋亡相關蛋白表達的影響

本文旨在探討大田軟海綿酸對人羊膜細胞DNA的損傷及凋亡相關蛋白表達的影響。實驗用0、20、40、60、80、100nmol/L OA誘導FL細胞4h后，檢測DNA損傷程度的彗星實驗表明，OA對FL細胞DNA的損傷隨染毒濃度的升高而增加。蛋白免疫印跡法顯示凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax和p53的表達與染毒濃度呈負相關；用100nmol/L OA分別誘導2h、4h、8h后發現，三種蛋白的表達與染毒時間也呈負相關。由此可知在OA誘導的FL細胞凋亡中，損傷DNA，降低Bcl-2蛋白的表達可能參與了凋亡的部分作用，而Bax和p53蛋白則可能與OA誘導的細胞增殖有關。

抗大田軟海綿酸單克隆抗體的制備、純化及其特性

用大田軟海綿酸與人IgG的偶聯物OA-IgG作為免疫原，免疫BALB/c小鼠，通過常規細胞融合技術將免疫脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞系SP2/0融合，用間接競爭ELISA方法對融合細胞所分泌抗體的特異性進行篩選。經過3次克隆，獲得1株可穩定分泌抗OA的雜交瘤細胞株3C5，其染色體數為50±2，所分泌杭體屬IgG1亞類，相對分子質量是159390，抗體親和常數為9.8×10^8L/mol，滴度達2.56×l0^6。

大田軟海綿酸誘導細胞凋亡的機制

大田軟海綿酸是一種公認的促癌劑，也是腹瀉性貝類毒素的主要成分之一，主要由共生于大田軟海綿和隱瓜海綿中的利馬原甲藻所產生，它在細胞的生長、分化，代謝和死亡中都起著重要的調節作用：現在它已作為一種非常有效的生物工具藥被廣泛用于基礎生命科學的研究，其中有關它對不同細胞株的復雜凋亡誘導機制更是得到了普遍的關注和重視。本文主要概述Fas-FasL，Caspase，Bcl-2和p53等在大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)誘導的細胞凋亡機制中的作用。 
Okadaic acid  25.micro.g
Okadaic acid 50.micro.g
Okadaic acid 100.micro.g
Okadaic acid 1 mg
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