BiWriter 外泌體分離純化儀集成度高：

     1、集成自動(dòng)化臭氧滅菌功能，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化滅菌；

     2、集成制冷功能，保持外泌體活性；

     3、先進(jìn)的傳感器與操控系統(tǒng)結(jié)合，具備自適應(yīng)過濾壓力調(diào)控功能，維持高效的外泌體切向流過濾；

     4、自動(dòng)樣品回收功能，一鍵操控濃縮后外泌體的回收；

     5、過濾效率高，1H 內(nèi)完成 500mL 細(xì)胞上清液的 20 倍外泌體濃縮富集，4L 內(nèi)完成 2L 細(xì)胞上清的 10 倍外泌體濃縮富集。

BiWriter 外泌體分離純化儀采用 TFF 分離方法：

  相比于超速離心法、尺寸排阻色譜法、免疫親和法、微流控芯片法，超濾法是目前外泌體濃縮分離的最高效方法。鑒于普通超濾容易因?yàn)V膜孔堵塞導(dǎo)致難以有效過濾，切向流超濾改變膜表面流體特性可有效減少濾膜孔堵塞，是超濾法中最具商業(yè)應(yīng)用價(jià)值的外泌體分離方法。

BiWriter 外泌體分離純化儀與國內(nèi)同類型儀器比較

廠家	方法	儀器價(jià)格	耗材價(jià)格	主要市場(chǎng)局限
頭部廠家 A	TFF	20W 以上	極高 （1W以上）	設(shè)備昂貴，10L 濃縮的單次使用成本 1W 以上，適合于規(guī)模化的外泌體生產(chǎn)應(yīng)用
頭部廠家 B	TFF+超聲	20W 以上	高	設(shè)備昂貴，處理時(shí)間長，適合科研級(jí)別外泌體回收。
BiWriter	TFF	10W 以下	低 （200以下）	設(shè)備價(jià)格適中，理量0.5-2L,適合中等規(guī)模的干細(xì)胞 GMP實(shí)驗(yàn)室實(shí)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)廢液的即刻回收

3.1 、如上圖紅框部分所示，選擇要清洗的液體總量（如 300ml，500ml）。

3.2 、在滅菌瓶中加入超過清洗量的去離子水（或瓶裝娃哈哈純凈水），并將滅菌瓶放在屏幕后的載物臺(tái)上。

3.3 、點(diǎn)擊紅框部分的“START”按鍵，啟動(dòng)儀器的膜與管路清洗功能。

3.4 、清洗完畢后，界面會(huì)顯示清洗完畢提示即表示已經(jīng)完成清洗。

4.1 、滅菌瓶中裝入 500ml 的去離子水（或瓶裝娃哈哈純凈水），瓶蓋不得擰緊，保證可將瓶?jī)?nèi)的氣體排??（滅菌時(shí)會(huì)產(chǎn)生臭氧）。

4.2 、為保證管路連接處的無菌，可在滅菌前，將 1，2，3，4，5 號(hào)管路接口噴上 3%過氧化氫，進(jìn)行連接處的滅菌。

4.3 、將 5 號(hào)管路連接到滅菌瓶的回流管。

4.4 、紅框部位點(diǎn)擊選擇滅菌時(shí)間，推薦時(shí)長為“120min”。點(diǎn)擊紅框內(nèi)的“START”按鍵，啟動(dòng)滅菌程序。

4.5 、滅菌原理：儀器會(huì)自動(dòng)產(chǎn)生臭氧經(jīng) 0.22μm 濾膜，通過管道 6 進(jìn)入射流器，與管路內(nèi)的去離子水均勻混合制備??臭氧水。而后儀器自動(dòng)開啟或關(guān)閉管路，將所有的管路進(jìn)行滅菌。

4.6 、如最求快速滅菌可在滅菌瓶中加入 3%過氧化氫，選擇“60min”進(jìn)行快速滅菌。

4.7 、滅菌過程可觀察過濾隔板兩側(cè)是否有液體流??并再次交叉擰緊 2個(gè)手輪（膜裝載時(shí)如直接手?jǐn)Q手輪，由于有空氣存在導(dǎo)致的擰緊過程中壓合效果不是十分理想）。

5.1 、點(diǎn)擊屏幕右上角的藍(lán)色按鍵，切換屏幕至過“RUN SETTING”液面，直接點(diǎn)擊“START”按鍵，進(jìn)行壓力測(cè)試。

5.2 、運(yùn)行儀器 5min，期間觀察是否有液體從過濾隔板滲??。如有液體滲??，則反復(fù)擰緊 2 個(gè)手輪，至液體不再滲??。

5.3 、點(diǎn)擊“STOP”按鍵，結(jié)束壓力測(cè)試。通過點(diǎn)擊 2 次右上角的切屏按鍵，跳轉(zhuǎn)回“Filter LOADING”頁面。將 5 號(hào)管連接至廢液瓶，并點(diǎn)擊 “PUMP”按鍵將臭氧水排空。

6.1 、點(diǎn)擊屏幕右上角的切屏按鍵，將屏幕切換至“RUN SETTING”頁面。

6.2 、將經(jīng)過高壓滅菌的樣品瓶取??，將 4 號(hào)管與樣品瓶的進(jìn)液口連接，1 號(hào)管與樣品瓶的回流口連接，2 號(hào)管與收集瓶連接，3 號(hào)口與濾過液收集瓶連接（樣品瓶、收集瓶、濾過液瓶瓶蓋不得旋死，保證常壓狀態(tài)）。注：樣品瓶必需放在屏幕后的載物臺(tái)上，系統(tǒng)在濃縮過程中才能感應(yīng)液體變化，并依據(jù)設(shè)定的參數(shù)自動(dòng)結(jié)束濃縮過程。

6.3 、將經(jīng)過 0.22μm 濾膜過濾除去細(xì)胞碎片的細(xì)胞培養(yǎng)液加入樣品瓶中。設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)：選擇好樣品的體積，濃縮倍數(shù)，及過濾壓力。點(diǎn)擊“START”按鍵，開始外泌體濃縮。

6.4 、濃縮過程中“RUN SETTING”頁面的下半部分會(huì)實(shí)時(shí)更新并顯示參數(shù)。其中壓力、速度、濾??體積每隔 1S 更新一次，圖表每隔 10S 更新一次。

6.5 、備注：A、另外一種接法為 1 號(hào)管保持原樣，將樣品瓶與 5 號(hào)管連接（此時(shí) 6 號(hào)管可以吸入經(jīng)過 0.22μm 過濾的空氣，補(bǔ)充樣品瓶因?yàn)V??導(dǎo)致的瓶?jī)?nèi)壓力損失。）B、如僅收集濾??液，可保持 1，2 好管原連接不動(dòng)，5 號(hào)管連接至樣品瓶，3 號(hào)連接至濾過液瓶。

6.6 、濃縮結(jié)束后頁面會(huì)自動(dòng)提示濃縮結(jié)束。此時(shí)如需要對(duì)濃縮的外泌體進(jìn)行純化，可加入 0.6 倍體積的生理鹽水到樣品瓶中，設(shè)定相應(yīng)的參數(shù)，點(diǎn)擊“START”按鍵進(jìn)行純化，去除多余的蛋白。

6.7 、重復(fù)上述 6.6 過程，即完成全部的純化步驟。

7.1 、點(diǎn)擊屏幕右上角的切換按鍵進(jìn)行屏幕切換，切換至“COLLECTION”頁面。并確認(rèn)樣品瓶放置在載物臺(tái)上。

7.2 、點(diǎn)擊“PUMP OUT”按鍵，進(jìn)行樣品回收。

7.3 、系統(tǒng)自動(dòng)會(huì)自動(dòng)確認(rèn)將樣品泵至收集瓶，并結(jié)束樣品回收程序。

7.4 、如果由于樣品瓶中液面低于管路，導(dǎo)致的樣品瓶中部分濃縮液殘留。可用物體對(duì)樣品瓶進(jìn)行單側(cè)墊高，令液面高于進(jìn)液管路，再次點(diǎn)擊“PUMP OUT”按鍵。

7.5 、重復(fù) 7.4 直至樣品完全回收入收集瓶。

7.6 、注：如果收集濾過液，則不需要執(zhí)行此樣品回收程序。

8.1 、將兩個(gè)手輪逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，將過濾板上部抬升，而后取出濾膜丟棄。

8.2 、順時(shí)針旋轉(zhuǎn)手輪，將濾板壓合，旋緊手輪。

8.3 、在“COLLECTION”頁面，選擇清洗的液體量，將各個(gè)管口歸位至初始的位置（即與射流器連接位置），將去離子水放置在載物臺(tái)上，連接 4 號(hào)管口與去離子水，5 號(hào)口連接廢液缸。

8.4 、選擇清洗量，點(diǎn)按“START”按鍵開始清洗，清洗完畢后，程序自動(dòng)結(jié)束并顯示清洗完成。